dna1小游戏攻略
今天,我将与大家共同探讨dna1小游戏攻略的今日更新,希望我的介绍能为有需要的朋友提供一些参考和建议。
1.游戏《主题医院1》第二关,怎么没有病人来看病呢?
2.有一个游戏是一个红色的生物逃出人类的科学实验室,里面有士兵,红色生物在逃亡的过程中,遇到士兵上前
3.生命简史古生物放置游戏新手攻略大全
4.重组dna技术包括哪些主要步骤
5.第一篇:DNA与染色体
6.1.参与DNA复制的主要酶类有哪些
游戏《主题医院1》第二关,怎么没有病人来看病呢?
你好!!
除了在最初准备齐全的设备以外,还要注意一些细节,比如,每条走廊都要有饮水机,保证医院不会太干燥,提高病人对医院的好感.
对于急诊病人;游戏中常会看到搭乘飞机而来的急诊病人,对于这些病人,意味着送钱的人来了,搞定他们,前几关游戏中,急诊病人大多为需要服药,大头病人或猫王综合症(精神诊断),因为最好这些房间搭建两个从容应付,8个以上的病人就得考虑两个诊室,这些急诊病人或不能治愈的话,当场会死给你看的.到中后面几关,手术中心会成为急诊的对象,但急诊病人到时,又有病人在排队,最好把急诊病人拉到最前面(点击诊室大门),一间手术中心大概可以应付4~5急诊病人,最后两关,会出现DNA修复装置,事实在普通病人中的得DNA病很少看到,这诊室基本是为急诊病人所设的.
房间布局;首行要考虑到急诊病人,诊室间的关系.考虑到急诊的关系,前几关可以将药房,充气机室,精神诊所,手术中心,尽量靠近飞机场;而且药房又可以解决很大部分的病人,因为药房最好建在一般诊断附近;在后面几关时,出现了传染病,处理好的话,卫生部将奖励你MONEY,反之则罚款,而传染源大多在一般诊断,因为这里病人比较集中,一般诊断最好建在大门处(下面俺会说原因);而像研究室和培训室,病房,洗手间,比较少病人的诊室可以放在远点的地方;病人光顾比较比较多的诊室最好放在离一般诊室较近的地方;所有房间最好走廊设宽些.
主要是在最初把重点放在建立病人的好感度上。
有一个游戏是一个红色的生物逃出人类的科学实验室,里面有士兵,红色生物在逃亡的过程中,遇到士兵上前
高中:
原理:
1.析出溶解在NaC1溶液中的DNA。
2.用冷酒精提取出含杂质较少的DNA。
3.DNA在沸水浴时被二苯胺染成蓝色。
方法步骤:
1.提取细胞核物质:顺时针方向搅拌,稍快,稍重。 5 min
2.溶解DNA:
3.析出含DNA的黏稠物:蒸馏水300mL,逆时针方向搅拌,缓慢
4.过滤:取黏稠物
5.再溶解:顺时针方向搅拌,较慢。3 min
6.过滤:取滤液。
7.提取出含杂质较少的DNA,逆时针方向搅拌,稍慢。5 min
8.DNA的鉴定:沸水浴5min
大学
DNA提取分为三个基本步骤,每个步骤的具体方法可根据样品种类、影响提取的物质以及后续步骤的不同而有区别。
利用研磨或者超声破碎细胞,并通过加入去污剂以除掉膜脂。
加入蛋白酶,醋酸盐沉淀,或者酚/氯仿抽提,以除掉细胞内的蛋白,如与DNA结合的组蛋白。
将DNA在冷乙醇或异丙醇中沉淀,因为DNA在醇中不可溶而黏在一起,这一步也能除掉盐分。
另外,目前也有利用吸附过柱的方法提取DNA的商业化试剂盒。
2.细胞的破碎
细菌有坚硬的细胞壁,首先要破碎经胞。方法有三种;①机械方法:超声波处理法、研磨法、匀浆法;②化学试剂法:用SDS处理细胞;③酶解法:加入溶菌酶或蜗牛酶,都可使细胞壁破碎。
3.DNA提取的几种方法
(1).浓盐法
A. 利用RNA和DNA在电解溶液中溶解度不同,将二者分离,常用的方法是用1M 氯 纳提取化钠抽提,得到的DNP粘液与含有少量辛醇的 氯仿一起摇荡,使乳化,再离心除去蛋白质,此时蛋白质凝胶停留在水相及氯仿相中间,而DNA位于上层水相中,用2倍体积95%乙醇可将DNA 钠盐沉淀出来.
B. 也可用0.15 MNaCL液反复洗涤细胞破碎液除去RNP,再以1MNaCL提取脱氧核糖蛋白,再按氯仿---异醇法除去蛋白.
两种方法比较,后种方法使核酸降解可能少一些.
C.以稀盐酸溶液提取DNA 时,加入适量去污剂,如SDS可有助于蛋白质与DNA 的分离。在提取过程中为抑制组织中的DNase对DNA 的降解作用,在氯化钠溶液中加入柠檬酸钠作为金属离子的烙合剂.通常用.15MNaCL,0.015M柠檬钠,并称SSC溶液,提取DNA. (2).阴离子去污剂法; 用SDS或二甲苯酸钠等去污剂使蛋白质变性,可以直接从生物材料中提取DNA .由于细胞中DNA与蛋白质之间常借静电引力或配位键结合,因为阴离子去污剂能够破坏这种价键,所以常用阴离子去污剂提取DNA
(3).苯酚抽提法:苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用.用苯酚处理匀浆液时,由于蛋白与DNA 联结键已断,蛋白分子表面又含有很多极性基团与苯酚相似相溶。蛋白分子溶于酚相,而DNA溶于水相。离心分层后取出水层,多次重复操作,再合并含DNA 的水相,利用核酸不溶于醇的性质,用乙醇沉淀DNA 。此时DNA是十分粘稠的物质,可用玻璃漫漫绕成一团,取出。此法的特点是使提取的DNA保持天然状态
(4).水抽提法:利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA,然后将沉淀溶于水中,使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ,80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.
生命简史古生物放置游戏新手攻略大全
一、蟒蛇类
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空中蛇灾(Snakes on a Plane)…毒蛇登航班,高空显惊魂
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狂蟒之灾(Anaconda )1、2…热带丛林里的巨型蟒蛇
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夺命蟒蛇(Daai se wong)…巨型大蟒蛇,早期类似《金刚》的**
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大蛇对大蟒(Boa vs. Python)…一条大蛇从实验室逃亡潜入城市下水道,造成市民恐慌
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灵蛇舞(snake man)…南美亚马逊森林中守护神秘长生部落的巨蟒
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蛇岛(Snake Island)…一群度假者抵达蛇岛,他们马上发现假期结束了!
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眼镜王蛇(King Cobra)…一次不当的实验后,大蟒蛇悄悄地来到并逐一吞食菲尔摩小镇的居民
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冷刀锋(Silent Predators)…建筑工地唤醒了地下成群的响尾蛇
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巨蟒出击(Rattled)…数百条响尾蛇的巢穴意外被毁,它们将伊甸谷小镇作为新家园
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人蛇大战…少见的台湾生物灾难**
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二、蜘蛛类
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八脚怪(Eight Legged Freaks)…巨型蜘蛛肆虐美国小镇
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天蛛地灭(Spiders)
天蛛地灭2/狂莽蛛灾(Spiders II: Breeding Ground)…美国太空实验不慎,蜘蛛发生DNA突变
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突出虫围(Arachnid)…巨型蜘蛛盘踞孤岛,人类注定无处可逃
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小魔煞(Arachnophobia)…一只来自丛林的特种蜘蛛来到小镇繁衍后代,最终酿成灾难
=========================================冰冻蜘蛛(Ice Spiders)…雪山实验室发生事故,变异蜘蛛以人为食
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三、苍蝇类
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苍蝇I(The FlyI)
苍蝇II(The FlyII)…极度恶心的人和苍蝇混合怪物
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四、海底章鱼
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极度深寒(Deep Rising)…深海大章鱼血洗游轮
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史前大章鱼(Octopus)…美国潜艇遭遇大海怪侵袭
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章鱼之东河惊魂(Octopus 2: River of Fear)…大章鱼入侵纽约,毁灭自由女神像
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北海巨妖(Kraken: Tentacles of the Deep)……儿子追寻大章鱼为父复仇
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五、海底鲨鱼
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大白鲨(Jaws)…斯皮尔博格成名作品
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水深火热(Deep Blue Sea)…科学实验创造智慧杀人鲨鱼
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变种鲨鱼人(Hammerhead: Shark Frenzy)
史前狂鲨(Megalodon)
怒海狂鲨(Raging Sharks)
水深火热之生化狂鲨(Shark Attack)
大白鲨之致命武器(Dark Waters)…变异鲨鱼
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颤栗汪洋(Open Water)
血海食人鲨(Blue Water, White Death)
新大白鲨(Cruel Jaws)…鲨鱼,还是食人鲨鱼
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六、鳄鱼类
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惊世巨鳄(Crocodile)1、2
史前巨鳄(Lac Placid)1、2
夺命大鳄鱼…(Killer Crocodile)…大鳄鱼
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万鳄巨兽(Primeval)…种族大屠杀,巨型大鳄鱼,人和动物哪个更可怕
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黑水(Black Water)…一个在澳大利亚北部鳄鱼栖息的红树林沼泽的可怕故事
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嗜血狂鳄(Croc)……一条活动于泰国某地对游客及当地居民生命造成巨大威胁的鳄鱼
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七、蜂类
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杀人蜂(The Swarm)…小小蜜蜂变异攻击人类,令人不寒而栗
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狂蜂暴(Deadly Swarm)…荒凉的墨西哥小镇,一群黄蜂妄图摧毁人类性命
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蜂魔(Swarmed)…铺天盖地的胡蜂追杀人类
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八、未知生物
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异形魔怪(Tremors)1、2、3、4…游走、隐藏与地下的未知怪兽
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魔窟(The Cave)
黑暗侵袭(The Descent)…深藏在黑暗洞窟中亿万年不见天日的未知生物
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蜈蚣(Centipede!)…深藏在黑暗洞窟中的变异蜈蚣,情节类似《黑暗侵袭》
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雷克斯暴龙(Carnosaur)…一位生物学家改变鸡蛋基因创造出硕大而残暴的恐龙,放逐在偏远小镇
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蝗虫大军:天降灾难(Locusts: The 8th Plague)…利用基因改造的蝗虫从美国一绝密研究机构逃脱
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军刀牙(Sabretooth)…科学家克隆的剑齿虎出逃实验室并猎食人类
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从地心拦截(DeepStar Six)…美国海军深海实验室受到前所未有的外来不明物体侵入
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惊爆无底洞(The Rift)…海底深渊中的变异生物,又是美国军方秘密试验的杰作
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狂犬惊魂(Cujo)…壮硕可爱的圣伯纳犬遭蝙蝠咬伤后,凶性大发成为夺命狂犬
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嗜血狂犬(The Breed)… 两个好朋友到小岛欢度周末,结果发现要同一群恶狗战斗
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猛犸惊魂(Mammoth)…博物馆内冰冻的猛玛巨象复活出逃,整个城市瞬间陷入凶猛的铁足之下
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侏罗纪公园(Jurassic Park)1、2、3…六千万年恐龙重现地球
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突变第三型(The Thing)…南极科考队冰原遭遇外星生物入侵
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漆黑一片(Pitch Black)……外星球上生活在黑夜中的异形生命
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撕裂人(Slither)…外星生物天降地球,形如蛞蝓附身人类
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异形(Alien)1、2、3、4
异形大战铁血战士1、2(AVP: Alien vs. Predator)…来自外太空的寄生生物
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进化(Evolution)…陨石中寄生的外星生物,越简单越进化,竟然葬身海飞丝洗发水
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异种(Species)1、2、3、4…宇航员从太空带回的异形生物
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星河战队(Starship Troopers)1、2…人类与外星巨型昆虫的战争
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哥斯拉(Godzilla)…法国核试验造就变异巨型蜥蜴,又是倒霉的纽约城
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汉江怪物(Gwoemul)…韩国版微缩版《哥斯拉》,父女亲情很感人
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绝命小魔星(Infested)…小小虱子也能突变成灾
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杀人鲸(Orca)……渔夫杀死怀孕雌鲸,雌鲸的配偶愤而复仇
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白鲸记(Moby Dick)……经典文学名著改编,人类与鲸鱼的战争
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科学怪鱼(Frankenfish)…嗜血程度媲美大白鲨,恐怖程度超越大蟒蛇
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恐怖食人鱼(Snakehead Terror)…化学泄露变异黑鱼登陆,寻找一切食物:动物、蔬菜、人类!
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异种大海怪(Humanoids from the Deep)…美国政府秘密生化实验,基因变种鱼脱逃至海中
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水虎鱼(Piranha)…以“鱼吃人”为题材的又一娱乐性影片
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蚂蚁雄兵(The Naked Jungle)…南美丛林中最可怕的食肉蚂蚁
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掠骨者(The Bone Snatcher)…无边无际的沙漠,无时无刻出现的地底怪物
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X射线(Them!)…巨型蚂蚁横行美国小镇
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变种DNA(Mimic)1、2、3…食人蟑螂伪装人类,散播致命病毒
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鬼蟑螂(They Crawl)…人类与蟑螂之间的战斗
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蟑螂杀手(The Nest)…怪异的进化现象作祟,蟑螂变成嗜血吃肉的怪物
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猛鼠食人城(Food of the Gods II)…误食实验激素而急遽变大的老鼠群占领城市
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鼠患(Rats)
人鼠大战(Of Unknown Origin)
大危机(Ben)…还是大老鼠和人类之间的战争
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嗜血狂狮(Prey)…本来梦寐以求的非洲之旅,竟变成人类与狮子杀戮之战
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黑夜幽灵(The Ghost and the Darkness)…食人狮破坏非洲铁路工程,袭击工人
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金刚(King Kong)…大猩猩大闹纽约
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《巨猩骄阳》怪物——大猩猩(中间感人,结尾完满)
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群鸟(The Birds)…动物灾难片先驱,名列希区柯克作品最受欢迎第七位
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食人火蜥蜴(Project Viper)…中美洲热带丛林里恐怖的变异蜥蜴
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疯羊(Black Sheep)…温顺的绵羊变成了凶猛的肉食动物
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异种魔蝎(Scorpius Gigantus)…实验室打算制造扑灭害虫的疫苗出错,这头巨兽出逃而且占据食物链的最上层!
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蛞蝓之灾(Slugs, muerte viscosa)…小镇垃圾场有毒废料改变蛞蝓基因,变成食肉怪兽并以惊人速度繁殖
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《惊心食人族》怪物——长有翅膀怎么杀都不死的怪物
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重组dna技术包括哪些主要步骤
生命简史古生物放置游戏中新手该怎么玩呢?新手小技巧又有哪些呢?今天小编就带来一篇生命简史古生物放置游戏新手攻略大全新手小技巧汇总,一起来看看吧:
新手攻略大全
1.晶片等级到了五以后,每次升到999级能拿到一个钻石,估计是后期拿钻石的途径。
2.研究点数降商店钻石花费的,最多降到百分之七十,能早点点满就点满。
3.加秒产百分比的那个,目前是给所有种群都加上相同数值的产量,所以只有前期有效,让你快去度过前期,慎重点,不要点太多,因为起作用的时候大概也就重生后十分钟内。
4.还有,每次重生后到重生时唯一给的打折的2分钟50倍dna加速强烈建议买,小编前面五次的都没买,现在心疼死了。
第一篇:DNA与染色体
重组DNA技术主要包括四个步骤:提取目的基因、目的基因与运载体结合、将目的基因导入受体细胞、目的基因的检测和表达。1、提取目的基因
获取目的基因主要有两条途径:一条是从供体细胞的DNA中直接分离基因;另一条是人工合成基因。直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法”。
2、目的基因与运载体结合
目的基因与运载体结合的过程实际上是不同来源的DNA重新组合的过程,是基因工程的核心。
3、将目的基因导入受体细胞
用人工方法使体外重组的DNA分子转移到受体细胞,主要是借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。目的基因导入受体细胞后,就可以随着受体细胞的繁殖而复制,由于细菌的繁殖速度非常快,在很短的时间内就能够获得大量的目的基因。
4、目的基因的检测和表达
目的基因导入受体细胞后,是否可以稳定维持和表达其遗传特性,只有通过检测与鉴定才能知道。受体细胞必须表现出特定的性状,才能说明目的基因完成了表达过程。
扩展资料
重组DNA技术是指将一种生物体(供体)的基因与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体)内,使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序,也称为分子克隆技术。因此,供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。
重组DNA技术使用的酶有限制性核酸内切酶、DNA连接酶。常用的载体有质粒载体、噬菌体载体、Ti质粒、人工染色体。
百度百科-重组DNA技术
1.参与DNA复制的主要酶类有哪些
一、 核酸的化学组成
(一)碱基(Bases):嘧啶碱和嘌呤碱
其中每个碱基都有两种可选的异构状态,不过嘌呤和嘧啶环上的氮原子一般以氨基形式存在,而不是亚氨基;鸟嘌呤和胸腺嘧啶的氧原子以酮式存在,很少以烯醇式形存在。
(二)核苷(Nucleosides):糖与碱基之间以糖苷键相连
核糖核苷
脱氧核糖核苷
(三)核苷酸(Nucleotides): 核苷与磷酸合成核苷酸
? 核糖核苷酸
? 脱氧核糖核苷酸
二、核酸的共价结构
(一)DNA的一级结构:DNA分子中的核苷酸序列
? DNA分子以 3’,5’-磷酸二酯键相连,形成5’-末端为自由的磷酸基团5: ,3’-末端为自由的羟基的链状结构
(二)DNA的二级结构
三、双螺旋模型的特征
1、主链:
(1)DNA分子由两条反向平行的多核苷酸链组成
(2)两条主链围绕同一中心轴相互缠绕,形成双螺旋,螺旋方向为右手螺旋
(3)糖-磷酸主链位于双螺旋的外侧,碱基位于双螺旋的内侧;
(4)碱基对平面与螺旋轴垂直
2、碱基配对:
? (1)碱基互补配对
3、螺旋参数:
(1)每一圈螺旋含10个碱基对
(2)双螺旋螺距为3.4nm,上下相邻碱基的垂直距离为0.34nm,交角为36°
(3)螺旋直径为2nm
4、大沟和小沟
? 大沟:宽2.2nm
? 小沟 :宽1.2nm
四、维持DNA双螺旋的作用力
? DNA的骨架由于带有负电荷的磷酸基团,所以在电荷没有被中和的情况下,双链之间存在不稳定因素—静电斥力。
1、氢键(Hydrogen bonding)
2、碱基堆积力:堆积碱基间的疏水作用
3、其他作用因素:(1)范德华力;(2)磷酸基的负电荷斥力
五、DNA双螺旋的多种形式
B-DNA: Watson-Crick 模型
A-DNA: 在较低的湿度下形成;RNA-RNA、RNA-DNA杂交分子具有A-DNA这种结构
Z-DNA: 左手螺旋的双螺旋DNA,其糖-磷酸骨架呈Z字形
一、超螺旋DNA(Superhelix DNA)
1、定义:DNA双螺旋自身盘绕而形成的空间结构
2. 功能:
(1)超螺旋DNA具有更为致密的结构,可以将很长的DNA分子压缩到染色体中
(2)对DNA的稳定性具有十分重要的意义
3. 正超螺旋和负超螺旋
(1)? 负超螺旋(negative supercoil):盘绕方向与DNA双螺旋方向相反
(2) 正超螺旋(positive supercoil): 盘绕方向与DNA双螺旋方同相同
4. 超螺旋的定量描述
? White 方程:L=T+W
(1)连接数(linking number , L)DNA闭环前两条链交叉的次数
(2)扭转数(twisting number , T)DNA分子中的Watson-Crick螺旋数目
(3)超螺旋数(缠绕数 , writhing number , W)双螺旋DNA自身盘绕的次数
二、拓扑异构体(Topoisomers)
具有不同连接数的相同DNA分子
三、拓扑异构酶 (Topoisomerase)
? 能够改变DNA连接数从而改变DNA分子超螺旋水平的酶
1、I型拓扑异构酶 :
作用机制:切开环状一条链,连接数改变±1,不需ATP
2、Ⅱ型拓扑异构酶:
作用机制: 切开环状两条链,连接数改变±2,需要ATP
? 大多数真核细胞是二倍体,同一个染色体的两个拷贝叫做同源染色体。当然也存在某些单倍体或多倍体细胞,如卵细胞和巨核细胞(一种产生血小板的细胞)。
一、染色体和染色质
1、染色质(chromatin)
? 指间期细胞核内由DNA、组蛋白、非组蛋白组成的线性复合结构, 是间期细胞遗传物质存在的形式。
2、染色体(chromosome):
? 指细胞在有丝分裂或减数分裂过程中, 由染色质聚缩而成的棒状结构。
3、二者关系
(1)染色质与染色体具有基本相同的化学组成,但包装程度不同,构象不同。
(2) 染色质与染色体是在细胞周期不同的功能阶段可以相互转变的的形态结构
二、真核生物的染色质
常染色质(Euchromatin):
? 间期细胞核中,螺旋化程度小、分散度大、浅染的染色质
? 特点:转录活跃
2、 异染色质(Heterochromatin):
? 间期高度压缩,螺旋化程度高、深染的染色质
特点:高度浓缩、 转录不活跃、在细胞周期中表现为晚复制(晚S期)、早凝缩
(1)组成性异染色质(结构性异染色质)在整个细胞周期内都处于凝聚状态的染色质,(主要为卫星DNA,构成染色体特殊区域,如着丝粒)
(2)功能性异染色质(兼性异染色质)
指在某些特定的细胞中,或在一定的发育时期和生理条件下凝聚,由常染色质转变而来的异染色质,如X 染色体,巴氏小体,是真核生物基因表达调控的一种途径
三、染色体的结构(chromosome structure)
1、有丝分裂期的染色体
2、着丝粒(Centromere)
? 指中期染色单体相互联系在一起的特殊部位,是纺锤体附着位点。
(1)功能:着丝粒指导一个精细的蛋白质复合体---动粒的形成,动粒结合微管,打动姐妹染色体分别进入不同的子细胞中。保证有丝分裂和减数分裂中复制的染色体平均分配到两个子细胞
(2)着丝粒DNA:
特点:含大量串联的重复序列---卫星DNA
酵母着丝粒DNA:为单一序列 (200bp),88bp富含AT序列+两侧保守区
哺乳动物着丝粒DNA:长序列+大量的重复序列
3、端粒(Telomere)
? 是真核生物染色体末端的起保护作用的一种特殊结构
? (1)功能:保持染色体的稳定性
(2)端粒DNA:
? 特点:短串联重复序列,人类的端粒具有5-TTAGGG-3重复序列、富含GC、形成特殊的二级结构
四、真核生物染色体和染色质的组成
? 化学组成: DNA / protein (蛋白质)
(一)蛋白质 :非组蛋白、组蛋白:H2A / H2B / H3 / H4/ H1
非组蛋白
(1) HMG蛋白(High mobility group protein)
? 特点: 相对分子质量小, 在凝胶电泳中迁移速度快
? 作用: 可能与DNA的超螺旋结构有关
(2) DNA结合蛋白
(3) A24非组蛋白:位于核小体内,功能不详
(二)组蛋白(Histones)
1、种类:核心组蛋白:H2A, H2B, H3 和 H4 ? 非核心组蛋白:H1
2、组蛋白的特点:
(1)分子量小(核心组蛋白:10-20 kDa ; H1 :约23 kDa )
(2)高度保守
(3)核心组蛋白都有一个保守的组蛋白折叠结构域
(4)碱性蛋白(20-30% Lys / Arg),带正电荷
(5)组蛋白肽链上氨基酸的分布具有不对称性,组蛋白N端尾巴
(6)核心组蛋白的可进行组蛋白修饰: 组蛋白乙酰化、组蛋白甲基化、组蛋白磷酸化
五、染色体的组装
(一)核小体(Nucleosome)
? 1、在真核细胞中大多数DNA被包装成核小体。核小体由8个组蛋白形成核心,147bp的DNA(核心DNA)围绕1.65圈。核小体之间的DNA称为连接DNA,这段没有被包装的DNA一般参与基因表达、复制或重组,常与调控过程的非组蛋白结合。
? 组蛋白核心是带正电荷的小分子八聚体蛋白质(含有大量的精氨酸或赖氨酸)与骨架带有负电荷的DNA结合。H2A、H2B、H3、H4是核心组蛋白。
特定的酶负责组蛋白的修饰,经过修饰的组蛋白尾巴能够聚集特异性蛋白质到染色质上。、
组蛋白的变构体影响核小体的功能。
2、核小体的组装
? 核小体组蛋白八聚体核心: (H2A /H2B / H3 / H4×2) , 146bp DNA 。
?在细胞中H3、H4结合成四聚体,先和DNA的中部和末端的小沟处结合,然后与两个H2A、H2B组成的二聚体构成核小体。每个核心组蛋白有一个N端尾巴延伸出来。暴露的尾巴对于DNA与组蛋白八聚体的集合不是必需的,但是尾巴上有许多可供修饰的位点,可以改变核小体的功能。
一旦核小体形成,DNA包装的下一步就是与组蛋白H1结合。H1分别与核小体一端的连接DNA及核小体结合DNA的中部DNA螺旋结合,加强核小体与DNA的紧密结合,增强了对于核小体DNA的保护,可以稳定核小体进一步的高级结构—30nm纤丝,由核小体圆盘堆叠成螺旋状构成,每圈大约有6个核小体。缺少组蛋白N端尾巴的核心组蛋白不能形成30nm纤丝。?
DNA与组蛋白八聚体的相互作用是动态的,即DNA会从核小体上间歇性地释放。在核小体重塑复合体的作用下,利用ATP水解为能量改变核小体的位置。滑动、转移。但是某些核小体是出于特定位置的。
(二)10nm纤丝
(三) 螺线管( 30nm 纤丝)
(四)突环(loop):螺线管结合到核骨架染色体骨架上形成突环
? 典型的原核细胞的染色体只有一个完整拷贝,另外经常带有质粒结构。
一、原核生物染色体的组成(E.coli)
1、拟核(nucleiod)
DNA: 闭合环状 (closed circular)、浓缩 (30-50 mg/ml)
2、DNA domains/loop
50-100 DNA 结构域/loop,每个 loop都保持相对独立性 Why?
? 有两点被结合蛋白固定在膜蛋白复合体上
一、酸碱性质:
1、DNA等电点4~4.5;
2、RNA 等电点 2~2.5;
3、带负电荷
4、在电泳过程中由负极向正极移动
二、浮力密度 (buoyant density)
三、紫外吸收 :
? DNA在260nm处有最大吸收值,碱基是造成吸收的主要原因。但是当双链结构变成单链时会使得该处的吸收值增大,称为增色效应。 吸光度增加到最大值的一半时的温度叫做DNA的熔点,用Tm表示。Tm值是DNA的特征常熟,很大程度上与DNA中GC含量以及溶液中的离子强度有关
四、应用:
(1) 核酸的定量
? 1mg/ml:A260 =20(dsDNA)
? 1mg/ml:A260 =25(ssDNA/RNA)
(2) DNA纯度的鉴定
? A260 / A280 =1.8,pure dsDNA
? A260 / A280 =2.0,pure RNA
A260 / A280 <1.0,pure protein
五、核酸的变性和复性
(一)变性 (Denaturation) : 核酸双螺旋区的氢键断裂,变成单链,不涉及共价键断裂。
1、 碱处理 (alkali)
? DNA:酮 (keto) ? 烯醇式 (enolate)→ 变性
2、 化学试剂 ? 尿素(Urea), 甲酰胺(formamide)等 ?
3、热变性(Thermal denaturation)
(1)熔解温度(Tm):DNA的双螺旋结构失去一半时对应的温度。
(2)影响DNA的Tm值的因素
① DNA均一性
均一性高,变性的温度范围越窄,据此可分析DNA的均一性
? ② G-C含量与Tm值成正相关
? ③ 介质中离子强度:离子强度高,Tm高
(二)复性(Renaturation)
变性DNA在适当(一般低于Tm 20-25℃)条件下,两条链重新缔合成双螺旋结构 。
1、影响复性的因素
(1)温度。热变性DNA在缓慢冷却时可以复性,快速冷却不能复性。
(2) DNA片段长度。DNA片段越大,复性越慢;
(3)DNA浓度。DNA浓度越大,复性越快。
参与DNA复制的主要酶类有:DNA聚合酶、拓扑异构酶、解旋酶、单链结合蛋白、引物酶、DNA连接酶。1、DNA聚合酶:催化核苷酸之间生成磷酸二酯键,也具有一定的校正功能;
2、拓扑异构酶:催化DNA超螺旋解开,使之变为双螺旋;
3、解旋酶:解开DNA双链,使之变为单链;
4、单链结合蛋白:和单链DNA结合,使之变为能够作为复制模板的稳定单链;
5、引物酶:以解旋后的单链DNA为模板,催化合成一小段带有3'-OH的RNA;
6、DNA连接酶:催化DNA双链中的一条单链缺口处游离的3'末端-OH与5'末端磷酸形成磷酸二酯键,从而把两段相邻的DNA链连成完整的链。
百度百科-DNA复制
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